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酶活性測(cè)定常用的方法有兩種
點(diǎn)擊次數(shù)：866 更新時(shí)間：2022-07-20
酶活性測(cè)定法是利用酶能專一而高效地催化化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)，通過測(cè)定酶促反應(yīng)速度來檢知體液等生物樣品中某種酶的含量和活性的分析技術(shù)。
酶促反應(yīng)速度的測(cè)定可采用兩種方式：
一、測(cè)定完成一定量反應(yīng)所需的時(shí)間；二、測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)的酶促反應(yīng)量。前者稱為終點(diǎn)法，后者稱為動(dòng)力學(xué)法。
終點(diǎn)法
該方式是在特定條件下，將樣品中要檢知的酶作用一定量的底物，然后根據(jù)反應(yīng)進(jìn)行到某一程度(即達(dá)到某一指標(biāo))所需要的時(shí)間長短來估計(jì)酶的活力。
其一個(gè)發(fā)展是采用檢測(cè)器對(duì)反應(yīng)進(jìn)行連續(xù)跟蹤，并在反應(yīng)達(dá)到某一程度時(shí)，精確地自動(dòng)記錄所需要的時(shí)間，這就是酶分析自動(dòng)化中的固定濃度法；另一個(gè)發(fā)展是作成簡便的酶檢測(cè)紙片。
動(dòng)力學(xué)法
該方式測(cè)定原理是：在一定條件下，酶促反應(yīng)速度和酶濃度成正比，因此測(cè)得反應(yīng)速度就需要求得酶濃度。待測(cè)的酶濃度是影響反應(yīng)速度的因素，其他因素都應(yīng)處于酶發(fā)揮催化作用的水平，為此應(yīng)選擇適宜的底物濃度、緩沖體系、溫度，并向反應(yīng)系統(tǒng)中添加必要的輔助因子。
常用的測(cè)定方法有取樣法和連續(xù)法。
取樣法是在酶反應(yīng)開始后不同的時(shí)間，從反應(yīng)系統(tǒng)中取出一定量的反應(yīng)液，并用適當(dāng)方法停止其反應(yīng)，再根據(jù)產(chǎn)物和底物在化學(xué)性質(zhì)上的差別進(jìn)行分析，求得單位時(shí)間內(nèi)酶促反應(yīng)的變化量。
連續(xù)法則是基于底物和產(chǎn)物在物理化學(xué)性質(zhì)上的不同，在反應(yīng)過程中對(duì)反應(yīng)系統(tǒng)添加酶的變性劑以終止反應(yīng)。常用的連續(xù)測(cè)定法是光吸收測(cè)定法，即根據(jù)產(chǎn)物和底物在某一波長或波段上有明顯的特征吸收差別而建立起來的連續(xù)觀測(cè)方法。幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測(cè)定，此外如熒光法、旋光法、電化學(xué)法也是常用的連續(xù)測(cè)定方法。
對(duì)不易直接測(cè)定的反應(yīng)，可使用酶偶聯(lián)分析法，即用過量、專一的“偶聯(lián)工具酶”，使被測(cè)反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行到某一可直接測(cè)定的階段。
近年來，酶活性的測(cè)定工作正向兩個(gè)方向發(fā)展，一是超微量酶活的靈敏測(cè)定，二是實(shí)現(xiàn)測(cè)定過程的自動(dòng)化控制。
